O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de biofilme e o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Pseudomonas aeruginosa isoladas na avaliação da qualidade microbiológica de 80 amostras de águas minerais naturais comercializadas em garrafões de 20 L. Foi realizada a quantificação de P. aeruginosa e enterococos; a pesquisa de coliformes totais, coliformes termotolerantes e de clostrídios sulfito redutores (CSR). A produção de biofilme de P. aeruginosa foi avaliada em caldo infusão cérebro-coração (BHI) e em água mineral natural estéril nas temperaturas de 25 e 35ºC por 24 e 48 h. A avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos foi realizada pelo teste de difusão em ágar (Kirby-Bauer). De 80 amostras analisadas, 40 (50%) apresentaram qualidade microbiológica insatisfatória segundo a RDC nº275/05. Trinta e oito (47,5%) amostras apresentaram P. aeruginosa, nove (11,2%) coliformes totais, quatro (5,0%) CSR e uma (1,2%) coliformes termotolerantes. Nenhuma amostra apresentou contaminação por enterococos. Dezesseis cepas (51,6%) de P. aeruginosa foram classificadas como não aderentes ou fracamente aderentes, tanto no BHI quanto na água mineral. Contudo, cinco cepas (16,1%) apresentaram-se fortemente aderentes nas duas matrizes, principalmente no caldo BHI e na temperatura de 25ºC. Cepas resistentes ou com resistência intermediária a antibióticos da classe dos aminoglicosídeos e/ou β-lactâmicos foram isoladas neste estudo. Concluiu-se que os isolados de P. aeruginosa foram capazes de produzir biofilme nas matrizes estudadas e apresentaram resistência a antimicrobianos. Metade das amostras apresentou qualidade microbiológica insatisfatória, principalmente devido à contaminação por P. aeruginosa (47,5%).

This study evaluated biofilm formation and antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa isolated to evaluate the microbiological quality of 80 natural mineral water samples sold in 20 L bottles. The quantity of P. aeruginosa and enterococci was assessed, including total coliforms, thermotolerant coliforms and sulfite-reducing clostridia (SRC). Biofilm production from P. aeruginosa was evaluated in brain heart infusion broth (BHI) and sterile natural mineral water at temperatures of 25 and 35ºC for 24 and 48 h. Antimicrobial susceptibility tests were performed using the agar diffusion method (Kirby-Bauer). Of the 80 samples analyzed, 40 (50%) presented unsatisfactory microbiological quality according to RDC no. 275/05. Thirty-eight (47.5%) samples presented P. aeruginosa, nine (11.2%) total coliforms, four (5.0%) SRC and one (1.2%) thermotolerant coliform. Sixteen P. aeruginosa strains (51.6%) were classified as non-adherent or weakly adherent, both in BHI as in mineral water. However, five strains (16.1%) were strongly adherent in the two matrices, mainly in BHI at the temperature of 25ºC. The study also isolated resistant or intermediate resistant strains to antibiotics of aminoglycosides and/or β-lactams classes. It was concluded that P. aeruginosa isolates were able to produce biofilm in the studied matrices and presented resistance to antimicrobials. Half of the samples presented unsatisfactory microbiological quality, mostly due to P. aeruginosa contamination.

A NBR ISO/IEC 17025:2005, uma das normas mais utilizadas em laboratórios de ensaio, descreve como um de seus critérios para a garantia da qualidade dos resultados analíticos a participação periódica dos laboratórios em ensaios de proficiência (EP). Os analitos, utilizados nos EP são materiais de referência (MR) provenientes de um mesmo lote, e devem apresentar características de homogeneidade e estabilidade. O objetivo deste estudo foi produzir um MR qualitativo destinado ao ensaio de pesquisa de Listeria monocytogenes em matriz queijo pela técnica de liofilização. Para a produção do MR, foi utilizado como matriz o queijo Minas frescal (QMF) ultrafiltrado. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo e submetida à liofilização, tendo a sacarose como crioprotetor. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável na temperatura de ≤-70°C durante todo o período estudado (10 meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35°C por quatro dias e a -20°C por 48 dias, e os resultados estatísticos indicam tendência à estabilidade. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um EP à temperatura máxima de 35°C por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular nesse período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo L. monocytogenes em matriz queijo.

The standard most used in testing laboratories, ISO/IEC 17025:2005, describes the participation of laboratories in periodic proficiency testing (PT), as a criteria for quality assurance of analytical results. The analyses used in PT are reference materials (MR) from the same lot, and must have characteristics of homogeneity and stability. This study aimed to produce a qualitative RM for detection of Listeria monocytogenes assays in cheese matrix. For the production of RM, Minas Frescal cheese (MFQ) was used as matrix. The matrix was distributed in flasks, contaminated with the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as cryoprotector. The RM produced was considered homogeneous and stable at -70°C during the entire period of study (10 months). The material showed stability at 4, 25, 30 and 35°C for 4 days and at -20°C the RM showed stability for 48 days, and the statistical results indicate a tendency to maintain stability. It was concluded that the material showed all the requirements of an RM quality and could be transported to the laboratory participants of a PT at 35°C up to 4 days, since the results indicate the maintenance of cell concentration during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing L. monocytogenes in cheese matrix.

O uso de materiais de referência (MR) é uma das principais ferramentas utilizadas para garantia e controle da qualidade de laboratórios de microbiologia de alimentos. No Brasil, a RDC n.º 12/01 da Anvisa prevê como um dos parâmetros para a avaliação da qualidade de queijos a enumeração de estafilococos coagulase positiva (ECP). O grande desafio na produção de MR destinados a ensaios microbiológicos é a instabilidade natural dos micro-organismos, o que dificulta o desenvolvimento e a manutenção desses MR. O objetivo deste estudo foi produzir um MR quantitativo destinado ao ensaio de enumeração de ECP em matriz queijo. Uma amostra de queijo ultrafiltrado com contagem de ECP <10 UFC/g e número de aeróbios viáveis de 1,22 × 10³ UFC/g foi utilizada como matriz para produção do MR. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo em concentração específica e submetida à liofilização. Como crioprotetor, foi utilizada sacarose. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável à temperatura < -70 ºC durante todo o período estudado (dez meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35 ºC durante quatro dias; contudo, os resultados indicam que, a 35 ºC, ocorre um decréscimo na concentração celular. A -20 ºC, o MR apresentou-se estável durante 48 dias. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um ensaio de proficiência a temperaturas de até 35 ºC por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular neste período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo ECP em matriz queijo.

The use of reference materials (RM) is one of the principal tools used for assurance and quality control in food microbiology laboratories. In Brazil, Anvisa RDC nº 12/01 specifies the enumeration of coagulase-positive staphylococcus (CPS) as one of the parameters for evaluating cheese quality. The main challenge in the production of RM destined for microbiological assays is the natural instability of the microorganisms, which makes it difficult to develop and maintain them. This study aimed to produce a quantitative RM for use in enumeration assays of CPS in cheese matrixes. A sample of an ultra-filtered cheese with a CPS count of <10 CFU/g and a total nº of viable aerobes of 1.2 × 10³ CFU/g was used as the matrix to produce the RM. The matrix was distributed in flasks, contaminated with specific concentrations of the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as the cryo-protector. The RM produced was considered homogeneous and stable at < -70ºC during the entire study period (10 months). The material was shown to be stable at 4, 25, 30 and 35 ºC for 4 days, although the results indicated a decrease in cell concentration at 35 ºC. At -20 ºC the RM was stable for 48 days. It was concluded that the material showed all the necessary requirements for a quality RM and could be transported to the laboratories taking part in a proficiency test at up to 35 ºC for up to 4 days, since the results indicated maintenance of the cell concentrations during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing CPS in a cheese matrix.

Doenças transmitidas por alimentos (DTA), causadas por microrganismos, representam um importante problema de saúde pública. O queijo Minas Frescal é um produto nacional, de tecnologia simples e elevada aceitação no País, tornando sua produção uma importante atividade econômica. Muitos microrganismos podem estar presentes neste alimento e, entre eles, destaca-se a bactéria Escherichia coli (E. coli). De modo geral, E. coli é um comensal inofensivo, entretanto, algumas cepas podem apresentar potencial patogênico. Diversos surtos de DTA, associados ao consumo de queijos contaminados, têm sido relatados e a presença de cepas patogênicas de E. coli cada vez mais observada. Este estudo teve como objetivo isolar, avaliar a suscetibilidade antimicrobiana e caracterizar molecularmente, através da Multiplex PCR, as cepas patogênicas de E. coli, isoladas de queijo Minas Frescal comercializado no município do Rio de Janeiro. Trinta amostras foram analisadas e cinco cepas de E. coli enteropatogênica (EPEC) identificadas. A avaliação da suscetibilidade antimicrobiana revelou 40% de resistência à ampicilina e 40% de perfil de resistência intermediária à associação ampicilina-sulbactam. Tais resultados representam um alerta para as autoridades sanitárias, uma vez que este alimento é um produto de pronto consumo e, portanto, precisa ser inócuo para que a saúde da população não seja colocada em risco.

Foodborne disease caused by microorganisms is a problem of public health. Minas soft cheese is a national product manufactured using simple technology; it has high level of acceptance in the country making its production an important economic activity. Many microorganisms may be present in foods including the bacterium Escherichia coli (E. coli). Overall, E. coli is a harmless commensal bacterium; however, some strains may have a pathogenic potential. Several outbreaks of foodborne diseases associated with consumption of contaminated cheese have been reported, and the presence of pathogenic strains of E. coli has increased. The objective of this study was to isolate, evaluate the antimicrobial susceptibility, and characterize, by Multiplex PCR, the pathogenic E. coli strains isolated from Minas cheese commercialized in Rio de Janeiro. Thirty samples were analyzed and five strains of E. coli (EPEC) were identified. The assessment of antimicrobial susceptibility revealed 40% of the isolates resistant to ampicillin and 40% with intermediate resistance to ampicillin-sulbactam combination. These findings are a warning signal to health authorities since Minas cheese is a ready to eat food product, and therefore should not pose health risks to the population.